Cárdenas Díaz, Ana M. (Directora de tesis)Almarza Salazar, Hugo2023-12-122023-12-122019Almarza, H. (2019). Alteraciones en la exocitosis en lineas celulares de pacientes portadores de disferlinopatía (Tesis de postgrado). Universidad de Valparaíso, Valparaíso, Chile.https://repositoriobibliotecas.uv.cl/handle/uvscl/13478Disferlina es una proteína altamente expresada en la membrana plasmática de células musculares. Se ha demostrado que la principal función de esta proteína es la reparación de membranas, por lo que su rol es fundamental para el mantenimiento de la integridad muscular. Mutaciones en el gen que codifica para disferlina (DYSF) son causantes de disferlinopatías, una enfermedad muscular congénita que incluye la distrofia muscular tipo 2B (LGMD2B) la miopatía de Miyoshi (MM) y la Miopatia distal. Disferlina posee siete dominios C2 con afinidad variable a Ca2+ y a fosfolípidos, los que están implicados en procesos de fusión de membranas mediados por proteínas SNARE. Esto último, sumado a que el tráfico de proteínas hacia la membrana plasmática se ve afectado en mioblastos de ratones deficientes de disferlina hace plausible suponer que disferlina podría jugar un papel en la exocitosis-dependiente de Ca2+. En el presente trabajo se estudió el proceso de exocitosis en líneas celulares de mioblastos provenientes de pacientes portadores de mutaciones en disferlina. Para monitorear la exocitosis se transfectaron los mioblastos con la Aminopeptidasa Regulada por Insulina (IRAP) fusionada a la sonda pHluorina, una proteína fluorescente verde sensible a pH. IRAP es ampliamente utilizada como reportero del tráfico del transportador de glucosa GLUT4, una ruta clave para el funcionamiento y el metabolismo de las células musculares. El constructo IRAP-pHluorina sobre-expresado en las líneas musculares fue visualizado mediante microscopía de reflexión total interna de la flurescencia (TIRF) bajo distintas condiciones experimentales. Nuestros resultados muestran que la estimulación con el ionóforo de Ca2+ ionomicina promueve abundantes eventos de exocitosis en la línea celular C25, correspondientes a mioblastos provenientes de un individuo sano. Sin embargo, el número de eventos inducidos por ionomicina en los mioblastos 379, 107, AB320 y ER, provenientes de músculo esquelético de pacientes con disferlinopatía, fue significativamente menor sugiriendo que defectos en el tráfico y/o en la exocitosis de vesículas contenedoras de GLUT4 podría ser un mecanismo afectado en células musculares con mutaciones en el gen DYSF.esNo autoriza publicaciónEXOCITOSISINMUNOCITOQUIMICAWESTERN BLOTTINGTesis