Examinando por Autor "De Giorgis Oliva, Daniela"

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    Regulation of voltage sensing structures of CaV1.2 calcium channel by the auxiliary β-subunit
    (Universidad de Valparaíso, 2023-04) De Giorgis Oliva, Daniela; Neely Delgueil, Alan
    Voltage-gated Calcium Channels (CaV) are the main entryway for calcium influx into excitable cells. High Voltage-gated Calcium Channels (HVA) have four homologous but nonidentical repeats encompassing a voltage-sensing domain (VSD) and a quarter of the pore. In a physiological context, HVA can be modulated at least by two accessory subunits 2, and . In 1993, Neely et al. reported that CaV subunits could facilitate channel opening without altering gating currents' voltage dependence, suggesting that the energetic interaction between voltage sensors and the pore is modified. I tested this hypothesis using the Voltage Clamp Fluorometry technique to track the movement of human CaV1.2 individual VSDs in the presence or absence of CaV subunits. I expressed 1c pore-forming subunit with 2-1 in Xenopus oocytes and used the cut-open technique to implement voltage-clamp. I found that CaV modulates mostly VSD II with negligible impact on VSD III and VSD IV behavior and that this VSDII is moving in two steps.
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    Rol de residuos ácidos en la selectividad a calcio de los canales CaV1.2
    (Universidad de Valparaíso, 2013) De Giorgis Oliva, Daniela; Neely Delgueil, Alan (Director de tesis)
    El calcio es un segundo mensajero clave para muchas respuestas celulares y los canales de Ca⁺² activados por voltaje (Caᵥ), son su principal vía de entrada a la célula. Los canales de Ca⁺² muestran una alta selectividad a Ca⁺² que se atribuye a un sitio de alta afinidad ubicado en el poro. Sin embargo, este sitio de unión genera una paradoja, dado que con una constante de disociación (KD) de 10¯⁶ M su velocidad de salida máxima teórica son 10³ iones por segundo, sin embargo el flujo de calcio es de cerca 106 iones por segundo. ¿Cómo puede pasar el Ca 1000 veces más rápido que lo que predice la afinidad del canal? Se ha sugerido que más de un calcio ocupa el canal y que la repulsión electrostática facilita el paso de iones a través del canal. Por otra parte solo se ha identificado un solo sitio de unión de alta afinidad que involucra cuatro residuos glutamatos conservados en posiciones equivalentes en la región del poro. Estudios realizados en esta estructura, demostraron que cada uno de estos glutamatos contribuye a la unión a Ca⁺². Modelos moleculares desarrollados en nuestro grupo revelaron la existencia de otro grupo de aminoácidos ácidos, ubicado hacia la cara externa del poro, y que por tanto podrían participar en la formación de un segundo sitio de unión de Ca⁺². Nuestra propuesta tiene como objetivo evaluar el rol de este segundo grupo de residuos acídicos en la selectividad y conducción de los canales de calcio y tratar de resolver la paradoja de la alta afinidad y conducción.