Facultad de Ciencias del Mar y Recursos Naturales

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Examinando Facultad de Ciencias del Mar y Recursos Naturales por Materia "CARACTERIZACIÓN"

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    Caracterización parcial de una proteína de membrana de Piscirickettsia salmonis aislada de tejidos naturalmente infectados
    (Universidad de Valparaíso, 2004) Almarza Pizarro, Oscar; Zahr Tajmuch, Marcela
    El patógeno intracelular Piscirickettsia salmonis es el agente causal del SRS (septicemia rickettsíal de salmónidos), enfermedad sistémica que ha provocado negativos impactos en la industria salmonicultora del sur de Chile. Como contribución a la caracterización de este patógeno, se practicaron métodos de solubílízación con el detergente Triton X-114 y con el uso de la homogenización celular mecánica (Homogenizador celular Braun MSK), además de extracciones diferenciales con SDS y Genapol, con la finalidad de obtener los componentes estructurales de la membrana externa de esta bacteria. Las diferentes metodologías de extracción fueron aplicadas sobre riñones e hígados extraídos asépticamente desde 39 peces (Oncorhynchus kisutch) infectados con la bacteria. A través de los análisis en SDS-PAGE y Westem blot de la fracción final soluble GenS, originada en las etapas de extracción mencionadas, se logró la identificación de tres componentes proteicos principales con pesos moleculares estimados en 99.7, 47.9 y 28.5 kDa. Utilizando procedimientos de efusión, estas proteínas fueron recuperadas desde los geles de acrilamida y sometidas a diversos estudios, lográndose determinar la dependencia de la movilidad electroforética en relación con la temperatura de solubilización de la muestra, observándose una disociación de la banda de mayor peso molecular (-99 kDa) en subunidades de menor peso molecular (-45 kDa) a temperaturas superiores a 70 °C. Además, mediciones de actividad de canal realizadas en membranas artificiales de bicapas lipídícas con las fracciones que contienen ambos grupos de proteínas (-99 kDa y -45 kDa), permitieron detectar la formación de canales, con una conductividad promedio de -1.4 nS. Las características descritas evidencian claramente la presencia de una proteína del tipo porina en la fracción soluble GenS, ya que el cambio migracional efecto de la temperatura corresponde a la disociación de la estructura oligomérica de la proteína. lo que implica la visualización de sus subunidades de menor peso molecular. Además, ambas fracciones comparten la misma conductividad promedio, la que se encuentra en el rango descrito para porinas de la membrana externa de otras bacterias gram negativas.