Regulación de la expresión de Rnf19a mediada por microRNAs en células somáticas y germinales de ratón.
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2021-10
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Universidad de Valparaíso
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Facultad de Medicina
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Escuela de Medicina
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Nota general
Opta al Grado de Magíster en Ciencias Médicas, mención en Biología Celular y Molecular
Resumen
La espermatogénesis implica una serie de etapas cuya correcta progresión requiere de una regulación precisa de la expresión génica, destacando a nivel post-transcripcional la regulación mediada por microRNAs. Rnf19a, localizado en el cromosoma 15 de ratón,
codifica para una ligasa de ubiquitina, y tiene tres secuencias homólogas (pseudogenes).
Este gen se expresa en células somáticas y, de forma diferencial, en células germinales masculinas de ratón. Tanto el mRNA de Rnf19a como el de los pseudogenes presentan sitios de unión a miRNAs (MREs) en sus regiones 3’ UTR, siendo comunes los de miR- 7013-5p, miR-7116-5p y miR-6373, los que ejercerían un rol regulador en la expresión del gen y sus pseudogenes. En el presente trabajo se estudió el efecto de la eliminación de los sitios de unión a los miRNAs en la expresión de Rnf19a. Por CRISPR-Cas9 se suprimió una región de 1.2 kb de la 3’-UTR de Rfn19a que contenía los MRE de interés.
Tras la selección clonal de las células editadas se obtuvieron colonias no mutadas, heterocigotas y con ambas copias del gen editadas. Por qPCR se observó una disminución estadísticamente significativa de Rnf19a en las colonias con la región 3’-UTR mutada en comparación al control no editado. La edición de la región 3’-UTR tuvo un efecto en la expresión de Rnf19a en las tres líneas celulares. Estos resultados muestran una
disparidad respecto a los resultados obtenidos con el gen reportero.
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Auspiciador
Palabras clave
ESPERMATOGENESIS EN ANIMALES, RATONES, REGULACIÓN GENÉTICA