Analísis de la variabilidad genética de la isla de patogeneidad (LIPI1) en cepas de Listeria Monocytogenes aisladas desde alimentos y de casos clínicos

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2014

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Listeria monocytogenes es el agente causal del cuadro clínico denominado Listeriosis. Esta enfermedad puede manifestarse como una gastroenteritis febril que generalmente es autolimitada, o bien, en su forma más severa e invasiva que se manifiesta como meningitis, meningoencefalitis e infecciones materno fetales. La patogenicidad de Listeria monocytogenes se relaciona principalmente con una isla de patogenicidad (LIPI-1) que contiene seis genes (prfA, hly, plcA, plcB, mpl y actA), que codifican para factores de virulencia implicados en la infección causada por la bacteria a nivel celular. Sin embargo, se desconoce cuál de estos factores tiene mayor importancia o puede ser considerado de mayor riesgo en el desarrollo de la enfermedad, ya que se ha observado que tanto cepas aisladas desde alimentos, reservorios animales, ambientales y de casos clínicos, poseen todos los genes de virulencia que conforman la isla. Por otro lado, los datos epidemiológicos indican que no todas las cepas de L. monocytogenes tienen la misma capacidad de producir enfermedad, observándose que en el 98% de los casos de listeriosis en humanos, los serotipos implicados son sólo 4 de los 13 descritos (1/2a, 1/2c, 1/2b y 4b). Así mismo, en base a distintos estudios genéticos y de subtipicación existirían tres grandes linajes que agruparían a las cepas de L. monocytogenes de acuerdo a sus serovariedades, pudiendo establecerse también una relación entre aquellas capaces de producir infección en humanos y las que se aíslan desde ambientes. El objetivo de este trabajo fue estudiar la variabilidad genética de la isla de patogenicidad (LIPI-1) en cepas de L. monocytogenes obtenidas desde alimentos y desde casos clínicos. Se trabajó con 96 cepas aisladas previamente desde diferentes alimentos (Fondecyt, 11075051) y con aislamientos clínicos obtenidos desde el Instituto de Salud Pública y que fueron colectados entre los años 2008 y 2009. Se diseñaron partidores dirigidos a los extremos de la isla de patogenicidad para su detección por PCR. Posteriormente, se realizó digestión del fragmento amplificado de la Isla LIPI-1, utilizando las enzimas de restricción PvuII y HaeIII, y finalmente se estudió la variabilidad genética entre las cepas de los distintos orígenes, a través de un análisis de similitud genética en base a la presencia o ausencia de los fragmentos de restricción obtenidos para cada cepa, los cuales fueron analizados con el Software Treecon para la elaboración de un dendrograma. La amplificación del fragmento de la isla de patogenicidad LIPI-1 se obtuvo en 96 cepas analizadas, de las cuales sólo en 73 se logró obtener un perfil de restricción al realizar la digestión con HaeIII y PvuII. Se pudo inferir que existe variabilidad genética de la isla LIPI-1, obteniéndose varios perfiles de restricci distintos, dentro de los cuales se observan claramente 3 “cluster”. Dentro del “cluster” I se incluyen 47 aislamientos de origen clínico y de alimentos, correspondientes mayoritariamente al serotipo 4b y 1/2b (linaje genético II), que se relacionan genéticamente con sobre un 80% de similitud y donde puede observarse un grupo clonal (100% similitud) formado por 32 aislamientos de alimentos y de origen clínico relacionados con brotes de listeriosis ocurridos en Chile durante los años 2008 y 2009, y que mayoritariamente pertenecen al serotipo 4b. Los “cluster” II y III agrupan a un menor número de cepas también de ambos orígenes, que corresponden a los linajes genéticos I y II, respectivamente, en donde aparecen los serotipos 1/2a y 1/2b que también son descritos como causantes de casos clínicos en humanos, pero referidos más bien a casos esporádicos y no a brotes epidémicos. Por lo tanto, es posible que a través del análisis de variabilidad genética de la Isla LIPI-1 se puedan establecer patrones de restricción característicos de cepas que potencialmente pueden ocasionar listeriosis en humanos y pueden dar cuenta del grado de virulencia de las mismas.

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VARIABILIDAD GENETICA, LISTERIA MONOCYTOGENES

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