Examinando por Autor "Neely Delgueil, Alan"

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    Especificidad en la regulación de endocitosis por subunidades auxiliares del canal de calcio en ovocitos de Xenopus Leavis
    (Universidad de Valparaíso, 2017-04) Navarro Quezada, Nieves; Neely Delgueil, Alan
    El calcio es uno de los mensajeros intracelulares más abundante, y media múltiples e importantes funciones en la célula. El transporte de calcio está principalmente controlado por los canales de calcio activados por voltaje (CCAV), que son proteínas multiméricas conformadas por una subunidad formadora del poro (Cavα1) y tres subunidades auxiliares (α2-δ, β y γ). La interacción entre Cavα1 y la subunidad auxiliar β (Cavβ) ocurre en un sitio denominado AID (alpha-interaction-domain), la unión de Cavβ al canal aumenta la expresión funcional del canal, presumiblemente por la liberación de proteínas del canal desde el retículo endoplásmico. Existe evidencia que Cavβ no sólo participa del transporte del canal hacia la membrana plasmática, sino también que modula su función, específicamente aumentando la probabilidad de apertura de éste a voltajes fisiológicamente relevantes. Trabajos anteriores de este laboratorio muestran que Cavβ2a regula también la remoción de canales desde la membrana plasmática a través de una interacción con dinamina. Esta interacción requiere de la formación de dímeros de Cavβ2a, donde contribuye un puente di-sulfuro entre cisteínas expuestas. En esta tesis se investigó si la isoforma Cavβ3xo carente de esta cisteína promueve endocitosis dinamina-dependiente. Para esto se desarrolló un bio- ensayo de endocitosis que consistía en medir la captación de la enzima horseradish peroxidasa (HRP) por ovocitos de Xenopus inyectadas con distintas combinaciones de Cavβ previamente purificadas. Esto nos permitió demostrar que subunidades Cavβ promueven la endocitosis sin la presencia de la subunidad Cavα1. Se observó que Cavβ3xo también es capaz de promover endocitosis de manera dinamina-dependiente pero con una eficacia un 50% menor.
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    Regulation of voltage sensing structures of CaV1.2 calcium channel by the auxiliary β-subunit
    (Universidad de Valparaíso, 2023-04) De Giorgis Oliva, Daniela; Neely Delgueil, Alan
    Voltage-gated Calcium Channels (CaV) are the main entryway for calcium influx into excitable cells. High Voltage-gated Calcium Channels (HVA) have four homologous but nonidentical repeats encompassing a voltage-sensing domain (VSD) and a quarter of the pore. In a physiological context, HVA can be modulated at least by two accessory subunits 2, and . In 1993, Neely et al. reported that CaV subunits could facilitate channel opening without altering gating currents' voltage dependence, suggesting that the energetic interaction between voltage sensors and the pore is modified. I tested this hypothesis using the Voltage Clamp Fluorometry technique to track the movement of human CaV1.2 individual VSDs in the presence or absence of CaV subunits. I expressed 1c pore-forming subunit with 2-1 in Xenopus oocytes and used the cut-open technique to implement voltage-clamp. I found that CaV modulates mostly VSD II with negligible impact on VSD III and VSD IV behavior and that this VSDII is moving in two steps.