Examinando por Autor "Pino Moya, Karina"
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Ítem Comparación de la foliculogénesis ovárica en hembras adultas jóvenes y de edad avanzada del "ratón cola de pincel" Octodon degus (Molina, 1782) (rodentia, octodontidae)(Universidad de Valparaíso, 2016) Pino Moya, Karina; Brown González, DonaldEl Octodon Degus es un roedor autóctono de la zona central de Chile. Se ha utilizado como animal de laboratorio en estudios del ciclo circadiano en animales diurnos y en enfermedades como el Alzheimer, diabetes mellitus y cataratas, que desarrollan de forma natural. Además, se postula como un buen modelo animal para estudios del ciclo reproductivo femenino ya que su ciclo estral tiene una duración de 17-21 días, similar al de grandes mamíferos y, a diferencia de otros roedores de laboratorio, tiene una fase lútea verdadera. En este trabajo se comparó la foliculogénesis en ovarios de hembras adultas jóvenes (4 meses, 6-7 meses) y de edad avanzada (2-6 años). Las muestras fueron fijadas en Bouin acuoso y procesadas por técnica histológica de rutina, empleando el método tricrómico de Arteta como tinción. Se realizó una descripción morfológica de los folículos, un recuento y medición del diámetro, así como de los cuerpos lúteos. Para la detección de caspasa-3 como indicador de apoptosis, se realizó inmunohistoquímica con diaminobencidina como cromógeno. Al comparar los tres grupos etarios, no hay diferencias morfológicas importantes en los folículos sanos y atrésicos, y cuerpos lúteos. El número de folículos primordiales disminuyó con la edad, el número de folículos primarios es mayor en hembras de 6-7 meses de edad. El número de cuerpos lúteos fue mayor en las hembras de edad avanzada. No hay diferencias significativas en: el número de folículos atrésicos, el diámetro de los tipos foliculares y de los cuerpos lúteos. Hay inmunotinción en los cuerpos apoptóticos de folículos terciarios atrésicos, en ovocitos en degeneración y en cuerpos lúteos. La morfología de los folículos y cuerpos lúteos es similar a la de otros mamíferos. El diámetro folicular aumenta durante la foliculogénesis, consistente con un aumento del diámetro del ovocito y vesícula germinativa a medida que avanza el proceso; el crecimiento ovocitario se da desde los folículos primarios hasta detenerse en los secundarios. La edad de las hembras influyó en el número de folículos (primordiales y primarios). Las condiciones de cautiverio (jaulas sólo de hembras) y probablemente animales en distintas etapas del ciclo ovárico, influyó en el número de cuerpos lúteos presentes en los ovarios.Ítem Regulación de la expresión de Rnf19a mediada por microRNAs en células somáticas y germinales de ratón.(Universidad de Valparaíso, 2021-10) Pino Moya, Karina; Párraga San Román, MarioLa espermatogénesis implica una serie de etapas cuya correcta progresión requiere de una regulación precisa de la expresión génica, destacando a nivel post-transcripcional la regulación mediada por microRNAs. Rnf19a, localizado en el cromosoma 15 de ratón, codifica para una ligasa de ubiquitina, y tiene tres secuencias homólogas (pseudogenes). Este gen se expresa en células somáticas y, de forma diferencial, en células germinales masculinas de ratón. Tanto el mRNA de Rnf19a como el de los pseudogenes presentan sitios de unión a miRNAs (MREs) en sus regiones 3’ UTR, siendo comunes los de miR- 7013-5p, miR-7116-5p y miR-6373, los que ejercerían un rol regulador en la expresión del gen y sus pseudogenes. En el presente trabajo se estudió el efecto de la eliminación de los sitios de unión a los miRNAs en la expresión de Rnf19a. Por CRISPR-Cas9 se suprimió una región de 1.2 kb de la 3’-UTR de Rfn19a que contenía los MRE de interés. Tras la selección clonal de las células editadas se obtuvieron colonias no mutadas, heterocigotas y con ambas copias del gen editadas. Por qPCR se observó una disminución estadísticamente significativa de Rnf19a en las colonias con la región 3’-UTR mutada en comparación al control no editado. La edición de la región 3’-UTR tuvo un efecto en la expresión de Rnf19a en las tres líneas celulares. Estos resultados muestran una disparidad respecto a los resultados obtenidos con el gen reportero.