Efecto de la fijación química en el reconocimiento de estructuras G-cuádruplex en el DNA

En el DNA, la unión de 4 guaninas mediante enlaces de hidrógeno diferentes a los propuestos por Watson y Crick, da lugar a la formación de una estructura cuadrada y plana llamada tétrada-G, y el apilamiento de 3 o más de estas estructuras se conoce como G-cuádruplex. A comienzos del siglo XXI y con el avance de técnicas biofísicas y de biología molecular, se descubrió la presencia de G-cuádruplex en el macronúcleo del protozoo Stylonchia lemnae. En el año 2013 se demostró mediante un anticuerpo específico llamado BG4 la presencia de estas estructuras en células humanas fijadas con formaldehído. Este anticuerpo se une a (interacciona) su antígeno (estructura G-cuádruplex) mediante el censado de una estructura tridimensional más que el de una secuencia nucleotídica. Esto supone un desafío al momento de ser ocupado en estudios inmunohistoquímicos e inmunofluorescentes, ya que fijadores de tipo aditivos como el formaldehido actúan creando enlaces proteína/proteína y proteína/DNA que podrían interferir con el reconocimiento de las estructuras G-cuádruplex mediante anticuerpos. En esta investigación se utilizó el anticuerpo BG4 para comparar la capacidad de inmunodetectar estructuras G-cuádruplex en células MCF-7 fijadas con paraformaldehído o metanol. Mediante microscopia de fluorescencia se evidenció en células fijadas con metanol un 73% más de focos fluorescentes en comparación con células fijadas con paraformaldehído (p<0.0001). Esto indica que el método de fijación que se utilice al estudiar estructuras G-cuádruplex mediante anticuerpos, influye en la cantidad relativa de focos fluorescentes detectados.