Evaluación de la regulación de la expresión de la enzima glutamatocisteína ligasa mediante el uso del mir433-3p transportado por el péptido ssIL-8a en líneas celulares no tumorales y tumorales de mama
Date
2023
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Profesor Guía
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TMG
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Universidad de Valparaíso
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Facultad
Facultad de Medicina
Departamento o Escuela
Escuela de Medicina
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Nota general
Opta al grado de Magíster en Ciencias Médicas, mención en Biología Celular y Molecular
Abstract
El cáncer es una enfermedad que posee múltiples procesos patológicos característicos que están relacionados con el estrés oxidativo. Se ha observado que las células tumorales de mama tienen una defensa antioxidante mejorada en comparación con las células normales, esto les proporciona resistencia contra los tratamientos tradicionales.
Un posible mecanismo de regulación de estas defensas antioxidantes de las células cancerosas es mediante RNAs no codificantes pequeños, en específico los microRNAs.
Uno de estos es el mir-433-3p el cual es un potencial candidato debido a su capacidad de regular la biosíntesis del antioxidante glutatión. Por otra parte, el ingreso del mir- 433-3p al interior de las células tumorales de mama requiere el uso de transportadores como los péptidos penetrantes entre ellos el péptido ss-IL-8α, péptido con capacidad antimicrobiana derivado de la IL8 de salmónidos. Esta investigación se centró en la caracterización y evaluación de los efectos producidos sobre la viabilidad celular y los niveles de la enzima glutamato-cisteína ligasa por el complejo péptido ss-IL- 8α/redoximiR mir-433-3p en líneas celulares de tumorales y no tumorales de mama.
La citotoxicidad se evaluó utilizando el ensayo de sulforodamina B (SRB) y se observó la capacidad de penetración del péptido ss IL-8α en tres líneas celulares de mama (MCF-10, MDA-MB-231 y MCF-7) mediante microscopía de fluorescencia (FM). Además, el complejo ss-IL-8α/ mir-433-3p se caracterizó mediante electroforesis en gel (EG), dispersión de luz dinámica (DLS) y potencial zeta (ZP). También se evaluó la capacidad de penetración (FM), capacidad de carga (qPCR) y el efecto sobre la expresión de la enzima GCL (ELISA) y GSH del complejo en las tres líneas celulares de mama en estudio.
Los resultados demostraron que el péptido ss-IL-8α no es citotóxico (0.625-50 μM) y es capaz de translocar al interior de las células estudiadas. Además, se demostró que es capaz de unirse al mir-433-3p (40:1) y transportarlo al interior de las células. Sin embargo, una vez que ingresa el mir-433-3p a las células tumorales de mama este no produce variación en la concentración de GCL, pero si un aumento de la concentración de GSH en la línea MCF-10A y MDA-MB-231.Concluyendo así que el péptido ss-IL-8α funciona como vector de transporte, pero aún faltan datos para evaluar su funcionalidad.
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Lugar de Publicación
Valparaíso
Auspiciador
Keywords
ESTRES OXIDATIVO, PEPTIDOS PENETRANTES CELULARES, MICRORNA MIR-433-3P, SSIL-8A, GLUTATION