Rol de los hemicanales de panexina en la migración celular de fibroblastos dérmicos

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2012

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Panexina 1 (Panx1) y Panexina 3 (Panx3) son proteínas integrales de membrana que comparten homología de secuencia con la familia de proteínas de uniones en hendidura (UH), inexinas (Inxs). Ambas, se expresan en la piel de mamíferos. Para investigar el papel de las Panxs en la migración de los fibroblastos, se emplearon fibroblastos dérmicos de embrionarios de rata de estadio 18 (E18), ratón tipo salvaje y humano. En este estudio, se determinaron los niveles de Panx1 endógena en los fibroblastos de las especies estudiadas. Mediante westernblot se detectó la expresión de Panx1 (~48 kDa) y sus diferentes isoformas glicosiladas en los fibroblastos de todas las especies estudiadas. Además, se observaron altos niveles de Conexina 43 (Cx43) en los distintos tipos de fibroblastos. Por otra parte, se realizaron análisis de RT-PCR, para estudiar la expresión de mRNA de Panx1 y Panx3 en los fibroblastos, se observó que el mRNA de Panx1 se encuentra en los fibroblastos de ratón tipo silvestre, por otra parte, se utilizó un control negativo que fueron fibroblastos de ratón knockout para la Panx1 (KO-Panx1), el mRNA de Panx1 no se encontró en estos ratones. El mRNA de la Panx3 se encuentra en los fibroblastos tanto de ratón tipo silvestre y el KO-Panx1. Con estos resultados, se estudió el papel de los hemicanales formados por conexina y panexinas en la migración de los fibroblastos. Mediante la utilización de bloqueadores específicos de hemicanales de Cx43 (péptidos miméticos de asa extracelular, La3+) y de bloqueadores químicos de Cxs, encontramos que la migración de fibroblastos no se afecta por acción de estos bloqueadores. Por lo tanto, en los ensayos de migración de fibroblastos, los hemicanales de Cx43 no participarían en las vías de regulación de la migración. Por otra parte, utilizando estrategias experimentales similares a las descritas anteriormente se estudió la participación de los hemicanales de Panexinas, Panx1 y Panx3, en la migración de los fibroblastos. Al bloquear los hemicanales de Panx existe un aumento en la migración de los fibroblastos, y a las ocho horas de tratamiento con el péptido mimético 10Panx (que tiene 100% de homología con la primera asa extracelular de la Panx1 y un 80 % de homología con la de la Panx3) hay un ~60% de disminución del área de la herida del cultivo. Se determinó que la Panx3 podría tener un rol en la migración de los fibroblastos ya que en los ensayos de migración de fibroblastos de ratón KO-Panx1, también el tratamiento con el 10Panx mejora la migración en un ~60%. Por último, se determinó que el bloqueo de los receptores purinérgicos P2X7 no afecta la migración de los fibroblastos; por lo tanto, el ATP no cumple una función principal en la migración de los fibroblastos.

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FIBROBLASTOS DERMICOS, HEMICANALES, MOVIMIENTO CELULAR

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