Estudio de la expresión y activación por voltaje de canales de panexina-1 en células ganglionares de retina de ratón

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2013

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Universidad de Valparaíso

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Programa de Licenciatura en Ciencias mencion Biologia o Quimica

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Las panexinas son una familia de proteínas de tres miembros descubiertas recientemente que forman canales de membrana. Aunque son estructuralmente similares a las conexinas se diferencian de estas al no compartir homología en sus secuencias. En varios tipos celulares, se ha descubierto que la Panexina-1 (Panx1) cumple funciones de mecanosensor, liberación de ATP, entre otras. Al demostrarse que están asociados a receptores P2X7 se ha relacionado la actividad de los canales de Panx1 con la formación de complejos proteicos asociados a respuestas inmunológicas. En la retina se ha demostrado una marcada expresión de Panx1 en la mayoría de sus capas, en particular en células ganglionares de la retina (CGR) donde se han relacionado con procesos patofisiológicos asociados con isquemia y glaucoma. En esta tesis, se propuso estudiar la expresión de Panx1 mediante inmunomarcaje con microscopía confocal y su función en la modulación de respuestas eléctricas en CGR. Se utilizó un protocolo propuesto de voltage clamp que por medio de rampas precondicionantes permitiría diferenciar corrientes de Panx1. Como controles para la inmunohistoquímica de retina se usaron ratones KO de Panx1. Para los registros electrofisiológicos se utilizaron ratones WT, bloqueadores de canales de Panx1 (carbenoxelona 5 µM y probenecida 200 µM) y células HeLa transfectadas con Panx1 como controles positivos. En la inmunohistoquímica se observó una marcación específica de Panx1 en la retina de ratones WT en la capa de células ganglionares (CCG) y la capa plexiforme interna (CPI). De manera controversial, se observó marcación específica de Panx1 en el ratón KO en las mismas capas del WT. Esto se puede atribuir a que la línea del ratón KO presenta un fenotipo hipomórfico de Panx1 (aprox. 50% de expresión) y no un KO global. En células HeLa y CGR el protocolo de voltage clamp no permitió observar corrientes específicas de Panx1. Sin embargo, al aplicar los bloqueadores de Panx1, se observaron leves variaciones en las corrientes evocadas a potenciales despolarizados en células HeLa y diferencias significativas solo en algunas condiciones al registrar CGR. En conclusión, los resultados de esta tesis indican que existe expresión de Panx1 en capas internas de la retina y que existe una leve modulación mediada por los canales de Panx1 de las respuestas eléctricas de CGR.

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Auspiciador

Palabras clave

CELULAS GANGLIONALES DE LA RETINA, NERVIO OPTICO, NEURONAS

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