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Examinando Facultad de Ciencias por Materia "ACTINAS"

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    Evaluación de la dinámica del citoesqueleto de actina en líneas celulares deficientes en disferlina y generación de un constructo Disferlina - GST
    (Universidad de Valparaíso, 2017) Figueroa Cares, Cindel; Cárdenas, Ana María (Directora de tesis)
    Disferlina es una proteína de 237 kDa que posee un solo dominio de transmembrana, que es altamente expresada en el músculo esquelético y juega un papel importante en la reparación de membranas plasmáticas y sarcolema dañados. Se ha informado que mutaciones en el gen que codifica para disferlina son causales de distrofias musculares, como la distrofia muscular de las extremidades del anillo óseo o de cinturas tipo 2B (LGMD 2B) y la miopatía distal de Miyoshi. Estas distrofias musculares, conocidas como disferlinopatías, se caracterizan por poseer elevados niveles séricos de CK, debilidad y atrofia muscular. En esta tesis de pregrado se realizaron dos investigaciones en forma paralela. Por una parte se evaluó el impacto de mutaciones en disferlina sobre la dinámica del citoesqueleto de F-actina ya que debido a la interacción que presenta disferlina con anexinas, esta proteína podría contribuir en el remodelamiento del citoesqueleto de actina. Esto se realizó utilizando distintas líneas celulares musculares obtenidas de pacientes portadores de mutaciones en esta proteína, las cuales se compararon con líneas celulares (células RCMH, C1 y C2) provenientes de músculo esquelético de un individuo sin patologías musculares. Específicamente se evaluó en estas líneas celulares la sensibilidad a un compuesto fúngico que impide la polimerización y elongación de los filamentos de actina, citocalasina D, y la capacidad de las distintas células de recuperar el citoesqueleto de F-actina después de ser tratadas con citocalasina D. La dinámica del citoesqueleto de F-actina se evaluó a través de microscopía de epifluorescencia utilizando una droga de unión a filamentos de actina, faloidina. En breve, tanto las líneas celulares provenientes de músculo esquelético de pacientes sanos, como aquellas provenientes de pacientes con disferlinopatías exhiben una dinámica variable del citoesqueleto, presentando distinta sensibilidad a citocalasina D y capacidad de recuperar la red de F-actina. En esta tesis también nos propusimos construir un plásmido recombinante que permita la expresión de disferlina con una etiqueta de Glutatión S-Transferasa (GST), a partir de un vector donde disferlina se hallaba fusionada a una variante de la proteína fluorescente verde GFP. Este constructo sería de gran utilidad para ensayos de asociación de disferlina con otras proteínas como actina. De esta manera se obtendría más información del mecanismo mediante el cual disferlina y otras proteínas actúan durante la reparación del sarcolema. La generación del constructo de disferlina–GST, no pudo lograrse en el tiempo establecido para esta investigación, pues hubo complicaciones debido al tamaño de la proteína y a los cebadores utilizados para realizar el traslado de disferlina al nuevo vector. Sin embargo, ya se está esperando la llegada de nuevos partidores para continuar con este proceso.
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    Impacto de una mutación causante de miopatía centronuclear en el rol de dinamina-2 en la morfología sináptica y en la expresión de receptores ampa en sinapsis excitatorias
    (Universidad de Valparaíso, 2021) Prado Vega, Lorena; González Jamett, Arlek (Directora de tesis)
    Dinamina-2 es una mecano-enzima con actividad GTP-asa que se expresa ubicuamente en distintos tejidos y participa en múltiples funciones tales como endocitosis, exocitosis y tráfico de proteínas de membrana. Dinamina-2 también es un importante regulador de la organización y remodelamiento del citoesqueleto de actina. Mutaciones en el gen que codifica dinamina-2 (DNM2) son causantes de miopatia centronuclear (MCN), una enfermedad muscular hereditaria que se caracteriza por debilidad y atrofia progresiva de la musculatura esquelética. Algunos reportes clínicos informan que pacientes con MCN también exhiben defectos cognitivos, aunque los mecanismos asociados nunca han sido reportados. En la presente tesis de magister se buscó entender el rol de dinamina-2 en dos aspectos claves para la consolidación del aprendizaje y la memoria como son: la estructura sináptica y la expresión superficial de receptores glutamatérgicos en sinapsis excitatorias. Específicamente evaluamos el número y morfología de espinas dendríticas en neuronas piramidales y la densidad de receptores AMPA en sinaptoneurosomas provenientes de hipocampo y corteza de un ratón knock-in (KI) portador de la mutación heterocigota p.R465W en el gen DNM2 (HTZ), que es la mutación que más comúnmente se asocia con MCN. Nuestros resultados demostraron que la cantidad total de receptores AMPAR disponibles en sinaptoneurosomas del cerebro de ratones HTZ en condiciones basales no fue diferente de lo observado en cerebros de ratones silvestres (WT). Sin embargo, la densidad de espinas dendríticas disminuyó de manera significativa en neuronas hipocampales y corticales de ratones HTZ comparados con la condición silvestre. Lo anterior sugiere que en el contexto de la MCN podría ocurrir una perdida de sinapsis funcionales explicando, al menos en parte, los defectos cognitivos descritos en pacientes.